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摘要 根据兽医学理论对慢性氟中毒辨证立方，拟定治疗阳虚的中药方Ⅰ、治疗阴虚的中药方Ⅱ及对照方Ⅲ，每组每只给予生药1g／day，用于同期饮含氟150mg／l水的大鼠，通过对空白对照组、中毒对照组以及中药各组的尿氟、血氟、骨氟及尿羟脯氨酸等指标检测，研究中毒对照组慢性氟中毒的发生，筛选出有较好排氟效应的中药方剂，并检测不同组中药方对肝、心等脏器的脂质过氧化物和超氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶抗氧化酶类的影响。结果表明，饮含氟150mg/l水的大鼠，3月后中毒对照组出现慢性氟中毒。中药方效果对比，中药方Ⅰ明显优于中药方Ⅱ和对照方。Jg9x5T(ZL@0

V[+IU(XD0关键词 慢性氟中毒 中药 排氟 抗氧化作用中国宠物医师网(A?t3FH5e8g s B4fQ

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动物慢性氟中毒(Chronic Fluorosis, CF) 在我国许多地方都有不同程度的发生[1]。加之近年来矿物性饲料添加剂的广泛应用，如果饲料级磷酸氢钙、碳酸钙等含氟量超过国家标准，则使CF发病动物越出地方性发生的特点而涉及面更趋广泛[2,3,4,5]。多年来治疗本病主要利用一些矿物质如蛇纹石、滑石粉或钙剂、镁剂、铝剂以及硒、钼等微量元素和维生素等，虽有一定效果，但同时不可避免地造成这些物质的残留，带来诸多副作用。本世纪80年代以来，我国学者借用治疗人慢性氟中毒的中药方剂苁蓉丸等治疗动物慢性氟中毒，其效果也不理想。这可能因人与动物，特别是与本病敏感动物反刍兽在生理解剖上大相径庭有关。为此，我们根据多年来治疗动物磷钙代谢障碍疾病的经验与对鹿慢性氟中毒的临床观察，以及目前现代兽医学对本病的研究成果—胶原是氟中毒的靶组织、过多的氟可通过干扰机体正常的氧化抗氧化平衡机制产生自由基确定以补肾壮骨、活血化瘀和利尿排氟为组方原则，以尿、血、骨中的氟含量、尿羟脯氨酸含量及裨脏器的过氧化脂质含量和抗氧化酶类活性[6]为检测指标，以期筛选出排氟效果好并对动体有保护作用的中药方剂。.?![8FjJn'FW0

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1 材料与方法中国宠物医师网!d\{1f:WR

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1.1 实验动物与分组 40日龄的Wistar纯系大鼠40只。随机分为A、B、C、D、E5组，：A组为空白对照组，饮单蒸水；B组为中毒对照组，饮含氟水(含氟150mg/l)；C组为中药方Ⅰ益智通关散加减+含氟水；D组为中药方Ⅱ健步通关散加减+含氟水；E为苁蓉丸含氟吕。中药方ⅠⅡⅢ含量均为生药0.5g。每天用量为1.5ml/只。所喂饲料为全价时机颗粒料，F，含量＜0.6mg/kg。@[P(^nnvA0

s-Mg;y3g4h&K(osW01.2 氟含量检测 新鲜尿液、血液，以3000r/min离心后取上清液；股骨去脂，干燥、灰化后，分别按文献[9，10]用氟离子选择电及法测定。b!uCyr?m0

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W+J*R$w01.3 尿羟脯氨酸（HYP）检测 用改良Stageman法[11]。标准品为Sigma公司产品。!{`&uAV@,C0

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{aA3K(H01．4 肝、心过氧化脂质及SOD和GSH-Px测定 试验结束时，大鼠数头处死，迅速取肝、心在冰浴中研磨，制成10%肝、心匀浆。过氧化脂质采用硫代巴比妥法[12]测定丙二醛（MDA）含量，以每克组织蛋白含有的MDA量（μmol）表示。SOD采用邻苯三酚自氧化法[13]，GSH-Px采用文献[14]方法。中国宠物医师网8A

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-J:w[3Ph*w01．5 数据分析处理 试验各组数据用方差分析（F）和新复极差多生比较。中国宠物医师网H'G[[\7`6Y8h4fv;C

CHe3AE0I;_02 结 果中国宠物医师网5OC

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-L }WLjVFP02.1 临床表现 90d试验结束，B组动物体重较A组为低，精神萎靡，行动迟缓，牙齿有轻微的褐色改变。中药各组无明显临床表现。TI

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2．2 尿氟含量 A组尿氟含量在整个试验期间显著低于其他组(P＜0.01 ＝，C组在30d时排氟量高达(75.694±19.0166)mg／L,与B组尿氟量(63.418±13.982)mg／L差异显著(P＜0.05＝,而C组与B组没有差异,E组则显著氏于B组(P＜0.05＝.50d时,C\D\E组尿氟量均显著高于B组(P＜0.05＝；70、90d时，B组与C、D、E组尿氟相比呈下降趋势，但组间差异不明显(P＞0.05)。emn]AP:N

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2.3 血、骨氟含量及尿HYP含量 血氟含量，A组与C、D、E各组没有显著差异（P＞0.05），而与B组在差异（P＜0.05＝。B组与C、D、E各组的血、骨氟含量均有显著差异（P＜0.05＝。C组与A、E组的骨氟含量没有显著差异（P＞0.05），而与D组有显著差异（P＜0.05＝。尿HYP含量，A组显著低于B组（P＜0.01＝和D组（P＜0.05＝，而A组与C、E组相比，没有显著差异（P＞0.05）；C、D、E组与B组相比，均有显著差异（P＜0.05或P＜0.01＝。C组显著低于D组（P＜0.05＝。:zRi0engj(bl0

;[:?L]'i"n1X02．4 肝MDA、SOD、GSH-Px含量 MDA含量，C、E组与A组接近，没有显著差异；B、D组显著高于A组（P＜0.05＝；C、D组比较，C组显著低于D组（P＜0.05＝。:k ^,P(X|

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SOD含量，C组稍高于A组，但二者没有统计学差异；B、D、E组均显著低于A组（P＜0.01＝，D组稍高于B组，但统计结果差异不显著，E组显著低于B组。TX-Sv[0

l`p'B'^(E0m0GSH-Px含量，B组显著低于A、C、D组（P＜0.01＝；A组与C、D组较接近，没有统计学上的差异，但显著高于E组（P＜0.01＝。中国宠物医师网*^

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\$Zh_o02．5 心MDA、SOD、GSH-Px含量 MDA含量，A显著低于其他4组（P＜0.01＝；与B组相比，C组显著为低，D、E组则显著为高（P＜0.05＝；与C组相比，D、E组显著高（P＜0.05＝。a*r5J([:k/|s*d0

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SOD含量，与A组比较，B组显著较低，而C、E组均较高，但只有C组有统计学上的差异（P＜0.01＝；与B组相比，D组没有差异，C、E组均显著为高；与B组相比，D组没有差异，D、E组均显著为高；C组D组相比差异也显著（P＜0.05＝。中国宠物医师网+`JX*q[&Jf

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GSH-Px含量，B组显著低于其他4组（P＜0.01＝；与A组相比，C、D、E组皆有不同程度的升高，但只有E组有统计学上的差异（P＜0.01＝。中国宠物医师网@"?*K,J"~2rzuT

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3 讨论中国宠物医师网,N(c

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3.1 实验性CF的诊断及中药方剂的排氟效应 CF对动物最影响的影响在于牙齿和骨骼，但由于大鼠牙齿本身带有色泽，饮含氟水（150mg/L）的大鼠3个月后，隐隐可看出氟斑牙症状，但不明显。由于血氟的相对稳定性和尿氟排泄易受多种因素如含氟水饮入量、肾功能、尿pH值及骨氟饱和状态等的影响，一般认为，尿氟、血氟可作为慢性氟中毒的辅助诊断指标，但不能作为可靠的诊断指标；氟摄入后近99%的氟化物集中于骨骼，使骨氟含量显著升高。测定骨氟含量不仅比X射线诊断具有早期的特点，并可克服X射线检查的非特异性缺点，因此通常把骨氟含量作为确认指标[15]。4^l[u'Kr0

].\1Q,N,b#\.d&X0对氟含量的检测显示，早期尿氟排泄量极高，中药方Ⅰ组高达所饮水含量的1/2，而中药方Ⅱ、Ⅲ均较低，说明中药方Ⅰ有较好的促进氟排泄作用。随着时间延长，尿氟排泄量减少，此可能与机体的应激适应有关。后期排氟量减少，大部分与机体的应激适应有关。后期排氟量减少，大部分贮留体内，沉积于各组织中，其中骨氟含量显著升高。骨氟含量，中毒对照组明显高于其他4组，为2000mg/kg，达到了通常慢性氟中毒的判定标准[16]。中药方Ⅰ的应用，减轻了骨氟的蓄积，显示出较好的排氟效应，对骨有一定的保护作用。但这种作用是通过氟排出减少体内蓄积，还是通过拮抗氟离子置换骨磷灰石中的羟基离子，减少骨矿化过程中由于氟离子的掺入使得骨羟磷灰石变成氟磷灰石而起保护作用，或者二者兼而有之，有待进一步探讨。中药方Ⅰ的拟方重在补肾助阳，而中药方Ⅱ则重在滋阴补肾。各种动物CF的发病症状，祖国医学辩证可将其归为脾肾阳虚型。本试验结果正好为祖国兽医学辩证立方相一致。3Lu$rxEKD0

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3．2 实验性CF大鼠的胶原损害及中药的保护作用 胶原是氟中毒的靶组织[17]，而胶原是构成骨、软骨、牙齿、肌肉、肾等组织器官结构的基础，机体中约50%的胶原存在于骨组织中，而HYP在胶原蛋白中含量最高，尿中游离HYP含量的改变，反映了胶原的受损程度，故HYP的测定可作为慢性氟中毒早期诊断的指标之一[18]。本试验显示，发生CF的动物HYP明显升高，说明其胶原受损较重。研究证实，实验性CF导致的胶原纤维损害，主要表现为胶原原纤维肿胀断裂、着色不均、排列紊乱等。对照方苁蓉丸显示出较好的抗氟保护胶原的作用，这与有关报道一致[19]。中药方Ⅰ与对照方苁蓉丸的HYP含量接近，表明中药方Ⅰ也可降低尿中游离HYP的含量，提示中药方Ⅰ可减轻氟对胶原的损害而起一定的保护作用。中国宠物医师网"HN[/r@9kq

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3．3 中药对CF大鼠抗氧化功能的影响 氟化物虽然主要侵害骨和牙齿，但对机体各系统都有一定的毒性作用。氟作为一种化学性质极活泼的元素，在体内外均可能形成自由基，或者可能通过过量氟干扰机体政党的氧化抗氧化机制，产生过多的氧自由基从而损伤膜系结构，造成脂质过氧化物的增高和消除自由基的酶活性降低[20]。减轻氟对机体各组织器官的毒性作用，则需拮抗自由基所触发的过氧化作用。应用中药单味或组方清除自由基，有较多的研究[21]。本试验结果表明，中药方Ⅰ可抑制肝、心组织内MDA含量的升高，提高抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性，而中药方Ⅱ对MDA及SOD无作用，但对GSH-Px酶活性有一定程度的提高。中药方Ⅱ对MDA及SOD无作用，但对GSH-Px酶活性有一定程度的提高。中药方Ⅲ对肝、心组织内MDA、SOD及GSH-Px作用不尽一致。这是否由于组方侧重不同，对于氟自由基或其触发的氧自由基攻击不饱和脂肪酸共价键，提高MDA的抑制能力不同；还是由于SOD、GSH-Px是不同的金属酶，不同中药组方所含微量元素的不同使得酶活性表现出不相一致的改变；以及各方的抗氧化作用与其排氟效应表现出一致性，是否可说明二者直接相关等，这些问题尚待进一步研究。cF+R+T[0

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